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293T细胞的培养与传代心得

时间:2015-10-30 19:17来源:网络 作者:佚名 点击: 点击此处获得【转发赠送积分】网址
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293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。

大家注意293t细胞的一个重要特性:室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁。

我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的,当时正是冬天,老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天,等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已经冻死了,肯定没救了。

但本着死马当活马医的想法在培养箱里放了一个星期,还是不见起色。正准备丢的时候,一次上网查293T细胞的特性时看到:“室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁”。

如获至宝,赶紧跑到实验室在显微镜下仔细寻找,竟然真的发现少量贴壁细胞,后来经过我们的细心呵护,这些细胞终于活了下来。通过这个也让我明白了一个道理,不到最后时刻不要轻言放弃。

言规正传,这个细胞我按照老板在美国的习惯处理:

用90%的DMEM+10%的胎牛血清培养37度培养箱。

这个细胞增殖很快,大概2-3天就要传代。需要提醒的是:细胞贴壁很疏松,换液时注意不要用力摇晃培养瓶,否则有可能会把细胞摇下来。

细胞 容易消化,我用0.02 g/L蛋白酶E消化半分钟就可以了。要注意的是:消化下来的细胞容易成团,要吹打很久才能把细胞打开。否则传代后细胞会成团生长,不均匀,影响试验结果。

作者:weiyanjie 点击:次

(责任编辑:hai)
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