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不同细胞siRNA转染效率检测讨论

时间:2015-10-30 19:18来源:网络 作者:佚名 点击: 点击此处获得【转发赠送积分】网址
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最近在做RNAi,用的siRNA,然后Real-Time PCR,发现抑制率仅20-30%左右,与说明书说的70-90%相去甚远。咨询一些相关人员后,认为可能是转染效率的问题,如果转染

不同细胞siRNA转染效率检测讨论

日期:2012-05-03     来源:未知

标签: RNAi 转染效率

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摘要 : 最近在做RNAi,用的siRNA,然后Real-Time PCR,发现抑制率仅20-30%左右,与说明书说的70-90%相去甚远。咨询一些相关人员后,认为可能是转染效率的问题,如果转染效率仅有20-30%,那抑制20-30%也就不少了。因此想请教一下,一般不同细胞通常转染效率是多少?

【求助】不同细胞sirna转染效率,如何检测?

最近在做RNAi,用的siRNA,然后Real-Time PCR,发现抑制率仅20-30%左右,与说明书说的70-90%相去甚远

咨询一些相关人员后,认为可能是转染效率的问题,如果转染效率仅有20-30%,那抑制20-30%也就不少了。

因此想请教一下,一般不同细胞通常转染效率是多少?

我用的是MT4(悬浮)、CEM(悬浮)、HepG2(贴壁)

听说悬浮细胞转染效率要低,原代更低,贴壁好一些,是否如此?

另外就是sirna的转染如何确定转染效率?

有人建议加上荧光,但是已经定了,好几千块钱,再定也不好;

或者阴性对照加上荧光,那样的话如何检测?

还有建议用个阳性对照,找个别人都做得很好的,抑制率很明确的基因来做个RNAi,再与自己的比较,那各位战友有什么建议没?

littleemma认为:

通常情况下悬浮细胞转染效率较低,贴壁细胞的转染效率因细胞不同,有些很高有些很低。HepG2的DNA转染效率大概有50%,siRNA暂时没做过。

如果你有GFP质粒和针对GFP的siRNA共转染,用只转染GFP质粒的孔做对照,可以看出转染效率。

如果没有针对GFP的siRNA就只能转染GFP质粒,一般情况下转染DNA好的话,转染siRNA也不会差的。个人觉得细胞本身的性质决定了转染效率。

littleemma认为:

如果HEK293或293T有你的目的基因的话,可以试一试在HEK293或293T中的干扰效率。因为HEK293或293T是认为转染效率较高的细胞。如果HEK293或293T效率好而你的细胞不好就是转染的问题;如果HEK293或293T干扰效果都不好,那你的siRNA可能设计的不太好。

lzc69:

请教littleemma,针对GFP的siRNA是不是在设计siRNA时就将GFP的表达序列设计进去?谢谢!!

littleemma:

不是的。针对GFP的siRNA和我们通常用的化学合成的siRNA一样,只不过是针对GFP基因的。

作者:keeii 点击:次

RNAi转染效率

(责任编辑:hai)
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